近期了解到有实验人员反应,作WB实验有失败的情况,怀疑与实验中使用的缓冲剂有关,可能是缓冲剂未灭菌或配制成溶液后感染了细菌导致的。那么WB实验的失败是否真的与缓冲剂染菌造成的呢?
WB实验即western blot蛋白质印迹实验,或称为免疫印迹实验,是将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF膜上,然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术。WB实验失败的原因有很多,缓冲剂只是其中一个影响因素。
缓冲剂长菌对WB实验影响
WB实验通常是不要求在无菌条件下操作的,因为本实验基本不会受到影响。基本可以确定,WB实验的失败不会是因为缓冲剂染菌导致,是其它原因。缓冲剂里即使有残留的细菌,其含有的蛋白质量是极少的,如果对实验产生影响,那么缓冲剂肯定早已经严重变质了,会直接注意到而不会使用。缓冲剂在发生这么严重的污染之前应该早就用完了。
缓冲剂离子强度对WB实验影响
缓冲剂未灭菌虽然对WB实验不会造成影响,不过其离子强度不合适有可能会造成WB实验失败。实验中通常是采用Tris作为缓冲剂,它有着较低的离子强度,不过在电泳过程中,通常会增加氯化钠,以提高离子强度加快电泳速率。而离子强度过高的话可能造对蛋白质造成影响,使WB实验失败。另外也要控制好缓冲剂pH值,这对WB实验至关重要。
所以说缓冲剂未灭菌或染菌与WB实验失败关系不大,更应该考虑缓冲剂的离子强度、pH值是否合适或者样品制备等问题。德晟是生物缓冲剂原料,可大量提供Tris、CAPS、MOPS等缓冲剂原料。