如何选择缓冲剂?
选择缓冲体系,其解离常数pKa值应该在设定的pH上下一个pH值单位内,因为缓冲液的pKa变化超过一个pH单位时,其缓冲能力就会明显下降;
缓冲体系不应影响蛋白质的活性或者DNA的稳定性,并避免其他离子的干扰;
另外,还要考虑温度的影响:温度不仅对缓冲液有影响,对细胞也有影响,大多数动物细胞在37℃的生理状况下pH为7.0~7.5,而在温度下降到0℃时可达到8.0。
一、磷suan盐缓冲液的优缺点:
是使用很广泛的一种缓冲剂,由于它有二级解离,所以缓冲的pH值范围很广,可配置各种pH值的酸性、碱性和中性缓冲液。
优点:
易配成各种浓度
适用pH范围宽
pH受温度影响小
稀释后pH变化小
缺点:
易与常见的钙离子、镁离子及重金属离子缔合成沉淀。
二、Tris缓冲液的优缺点:
Tris缓冲液是在生物化学研究中使用较广泛的一种缓冲剂,其本身为弱碱,常用有效pH在“中性”范围。
优点:
碱性较强,可以只用这一种缓冲液配置由酸到碱的但范围pH缓冲液;
对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀;
易吸收空气中的CO2,所以配制的缓冲液要盖严密封;
此缓冲液对某些pH电极发生一定干扰作用,所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。
缺点:
pH受浓度影响较大,稀释10倍,pH变化大于0.1
温度效应大,如4℃时pH=8.4,37℃时pH=7.4
三、HEPES缓冲液的优缺点:
HEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH7.2~7.4范围内具有较好的缓冲能力,常用在生化诊断试ji盒、DNA/RNA提取试ji盒及PCR诊断试ji盒里。
优点:
在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的pH值,并对细胞无毒性作用。
缺点:
在高浓度时对一些细胞可能有毒,与其他缓冲剂相比价格略贵。
四、PIPES缓冲液的优缺点:
PIPES是哌嗪缓冲液家族的一员,与HEPES属于同一家族。它是两性离子Good's缓冲液,在6.1至7.5的pH范围内有效。由于pH范围与HEPES略有不同,PIPES的浓度仅为HEPES浓度的一半。
优点:
该缓冲剂不会与金属络合,因此可用于含金属离子的溶液;
可以用于色谱分析,电子显微镜固定植物细胞,以及代替草甘膦缓冲液。
缺点:
当溶液的pH值升高到6.5以上时,PIPES的游离酸才容易溶解,但是PIPES的钠盐很容易溶解;
如果使用的是游离酸形式的缓冲液,请使用NaOH将其转化为钠盐,以提高在较低pH下的溶解度;
像HEPES一样,PIPES不适用于涉及氧化还原反应的实验,因为它会导致自由基的形成。